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要研究蛋白X在细胞中的行为 现为你提供了GFP(绿色荧光蛋白)的真核表达载体 蛋白X的cDN

2022-08-12 08:58:17 问答库 阅读 195 次

问题详情

要研究蛋白X在细胞中的行为,现为你提供了GFP(绿色荧光蛋白)的真核表达载体、蛋白X的cDNA和适当的细胞系,你如何来操作?如果GFP的信号弱,有什么可以补救的方法?


请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!

参考答案

正确答案:首先将cDNA克隆入GFP真核表达载体中。然后将这个重组质粒转入适当的细胞系当中使其表达该融合蛋白。最后在荧光显微镜下观察荧光的分布和运动从而间接研究蛋白x的行为。如果GFP的信号弱可以考虑换一个强启动子重新构建一个含GFP的表达载体或者更换表达细胞系或者用带有荧光素的GFP抗体来对细胞染色采用免疫荧光的方法来研究等等。
首先,将cDNA克隆入GFP真核表达载体中。然后,将这个重组质粒转入适当的细胞系当中,使其表达该融合蛋白。最后,在荧光显微镜下观察荧光的分布和运动从而间接研究蛋白x的行为。如果GFP的信号弱,可以考虑换一个强启动子,重新构建一个含GFP的表达载体,或者更换表达细胞系,或者用带有荧光素的GFP抗体来对细胞染色,采用免疫荧光的方法来研究,等等。

考点:蛋白,荧光