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什么是顺式作用元件?什么是反式作用因子?如果你得到一种新的顺式作用元件 你如何分离纯化到与它
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什么是顺式作用元件?什么是反式作用因子?如果你得到一种新的顺式作用元件,你如何分离纯化到与它结合的未知的反式作用因子?相反,你如何得到一种新的反式作用因子,你又如何鉴别出能够与它结合的未知的顺式作用元件?
参考答案
顺式作用元件即是负责调节基因转录的特殊的碱基序列,如HRE(激素反应元件)、HSE(热休克反应元件)和增强子等。反式作用因子是能够与顺式作用元件特异性结合的蛋白质因子,如脂溶性激素的受体。通过Mobility shift分析可以得到与一种顺式作用元件特异性结合的反式作用因子:当顺式作用元件结合上反式作用因子以后,其电泳性质将会发生变化,其条带位置将会改变。在有对照的条件下,进行电泳,找出泳动滞后的条带,分离结合的蛋白质也可以使用亲和层析法将顺式作用元件共价偶联到特殊的载体上,让细胞核抽取物通过此层析柱,能够与顺式作用元件特异性结合的蛋白质被吸附,这种蛋白质即是所需的反式作用因子。同样可以使用上面的方法得到顺式作用元件。